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    共同战“疫”,共克时艰,执着守护,静待春暖花开

    作者:上海捷瑞生物工程有限公司 浏览: 发表时间:2020-03-23 13:39:10

    共同战“疫”,共克时艰

    执着守护,静待春暖花开

        


                                                                                                     核“芯”

    春天来了,万物都在复苏,我们的对新冠病毒的战役也在慢慢的迎来了春天,在这次新冠肺炎的战役中,核酸检测试剂盒可谓是打赢这场战役的一把利剑,大放异彩,试剂盒中的探针就是试剂盒的核“芯”内容,今天我们就来看看探针都有哪些种类及特点

    探针种类


    磷酸化(Phosphorylation)

    特点及应用

    5'磷酸化可用于接头,克隆和基因构建以及连接酶催化的连接反应。3'磷酸化可抗3'外切酶消化的相关实验中,也用于阻止DNA聚合酶催化的DNA链延伸反应。

    生物素(Biotin)

    特点及应用

    引物生物素标记,可用于非放射性免疫分析来检测蛋白质、胞内化学染色、细胞分离、核酸分离、杂交检测特异性的DNA/RNA序列、离子通道构象变化等。


    地高辛(Digoxigenin)

    特点及应用

    地高辛标记的探针可用于各种杂交反应,如DNA-DNA杂交(Southern blotting)、DNA-RNA杂交(Northern blotting)、斑点杂交(Dot blotting)、克隆杂交、原位杂交以及酶联免疫分析(ELISA)。


    5'氨基修饰

    特点及应用

    可方便的用于制备功能化的寡核苷酸,广泛的应用在DNA芯片(DNA Microarray)和多重标记诊断系统。目前提供5' C6 氨基修饰,可用于连接一些即便靠近寡核苷酸也不会影响其功能的化合物。

    3'氨基修饰


    特点及应用

    目前提供3' C7 氨基修饰。它可用于设计新的诊断探针和反义核苷酸,例如5'端可用高度敏感的32P或荧光素标记的同时3'可用氨基修饰以进行其他的连接。另外3'修饰抗3'外切酶消化从而可用于反义实验。

    巯基(Thiol)

    特点及应用

    5'-巯基在很多方面与氨基修饰类似。巯基可用于加附各种修饰如荧光标记物和生物素。例如可以在碘乙酸和马来酰亚胺衍生物存在下来制作巯基连接的荧光探针。5'的巯基修饰主要用5'巯基修饰单体(5'-Thiol-Modifier C6-CE Phosphoramidite 或Thiol-Modifier C6 S-S CE Phosphoramidite)。用5'-Thiol-Modifier C6-CE单体修饰后必须进行硝酸银氧化以去除?;せ╰rityl),而Thiol-Modifier C6 S-S CE单体修饰后须用DTT将二硫键还原成巯基。

    间臂(Spacer)

    特点及应用

    Spacer 可为寡核苷酸标记提供必要的间隔以减少标记基团与寡核苷酸间的相互作用,主要应用于DNA发夹结构和双链结构研究。C3 spacer 主要用于模仿核糖的3'和5'羟基间的三碳间隔, 或“替代”一个序列中未知的碱基。3'-Spacer C3用于引进一个3'间臂从而阻止3'端外切酶和3'端聚合酶发挥作用。Spacer 18常用于引进一个强疏水基团。


    硫代(Phosphorthioate)

    特点及应用

    硫代修饰的寡核苷酸主要用于反义实验中防止被核酸酶降解。你可以选择全硫代,但随着硫代碱基的增加,寡核苷酸的Tm值会降低,为了降低这种这种影响,可以对引物两端2-5个碱基进行硫代修饰


    脱氧脲嘧啶 (DeoxyUridine,dU)


    特点及应用

    脱氧脲嘧啶可以插进寡核苷酸来增加双链的熔点温度从而增长双链的稳定性。每个脱氧胸腺嘧啶被脱氧脲嘧啶替代可以增长双链熔点温度1.7°C.



    脱氧次黄嘌呤(deoxyInosine,dI)

    特点及应用

    脱氧次黄嘌呤是一个自然存在的碱基,虽然不是真正意义上的通用碱基但当与其它碱基结合时会比其它碱基错配相对更稳定。脱氧次黄嘌呤与其它碱基的结合能力为dI:dC > dI:dA > dI:dG > dI:dT.在DNA聚合酶的催化下,脱氧次黄嘌呤首选与dC结合。



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